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2018年, 43卷, 第7期
刊出日期：2018-07-25
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2018, 43(7): 777-785.缩酚酸肽(depsipeptide)是一类天然产物活性物质，包含酯键的一类多肽，具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗疟和抗血栓等生物活性。本文综述了缩酚酸肽类化合物的来源、生物活性、作用机制以及临床研究等信息，并展望缩酚酸肽类药物研究开发的前景。
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2018, 43(7): 786-793.红景天苷是天然植物红景天的主要活性成分，它具有抗缺氧、抗炎、保肝和对神经与内分泌有调节作用等药理活性，长期以来，人们对化学全合成红景天苷作了研究，本文对它的全合成方法进行了综述。
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2018, 43(7): 794-800.抗生素在解决了许多细菌感染性疾病治疗问题的同时，其广泛不合理的应用以及细菌自身适应性的改变也加速了细菌耐药性的产生，对全球经济和公共健康带来严重危害。为了能够很好地监测细菌耐药性的变化和有效的指导临床用药，控制细菌的耐药性，建立细菌的耐药判定标准成为了一项具有实践意义的重要任务。建立耐药判定标准需要收集大量的信息，包括野生型细菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)分布，体外药效学和体内药动学的数据以及临床治疗相关的数据，主要包括野生型临界值、药效学临界值和临床临界值3个方面。本文综述了动物源性耐药判定标准的研究进展，总结了目前应用最广泛的两个折点制定组织美国临床实验室标准化协会(CLSI)和欧洲药敏实验标准化委员会(EUCAST)建立耐药判定标准的方法，为建立符合我国耐药现状的耐药判定标准提供理论基础。
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2018, 43(7): 801-805.侵袭性曲霉病是由致病曲霉菌引起的危及生命的真菌感染，主要致病菌为烟曲霉，而唑类抗真菌药物是临床治疗的首选。目前已上市的唑类抗真菌药物包括伊曲康唑，伏立康唑，泊沙康唑和伊沙康唑。然而，流行病学研究发现曲霉菌对唑类抗真菌药物的耐药率呈逐年上升趋势，给临床治疗造成了威胁。其中，Cyp51A蛋白突变、外排系统高表达以及环境耐药机制等多种因素都参与唑类抗真菌药物的耐药。因此，本文综述近年来有关曲霉菌对唑类抗真菌药物的耐药机制，以期为耐药监测、耐药菌控制和新药研发提供理论依据。
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2018, 43(7): 806-810.庆大霉素为临床上广泛应用的抗细菌性感染的氨基糖苷类抗生素。庆大霉素治疗后，约10%~25%的患者出现肾功能异常，甚至急性肾损伤症状。关于庆大霉素的肾毒性的机制研究主要集中在其可以引发肾小管上皮细胞发生氧化应激、炎性浸润、细胞凋亡信号通路激活以及激发自噬信号引起非正常自噬现象导致细胞损伤等方面。了解庆大霉素诱导的急性肾损伤机制，寻求减轻庆大霉素副作用的途径及天然药物有效成分，可更好的发挥庆大霉素的临床作用，并为肾损伤的治疗提供依据。
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2018, 43(7): 811-816.本实验室中保存的一株从土壤中分离得到的米尔贝链霉菌(Streptomyces milbemycinicus)27号菌株所产米尔贝霉素A3和A4的初始产量分别为61.0和23.8μg/mL。以该菌株为出发菌株，采用核糖体工程技术，结合紫外诱变技术，对米尔贝霉素产生菌米尔贝链霉菌进行诱变，并以链霉素耐受为筛选压力进行筛选。经过诱变后对单菌落进行摇瓶复筛，其中正突变株中米尔贝霉素产量最高的菌株编号是R2-6-5，其米尔贝霉素A3和A4的产量分别是105.2和38.8μg/mL，较原始菌株分别提高了72.5%和63.3%，且遗传稳定。最后，对产量变化较大的11株突变株基因组中rsmG基因和rspL基因进行突变位点分析，发现在rspL基因内均未发生突变，rsmG基因均发生突变。本研究表明，链霉素抗性降低的突变菌株确实都在相关基因内发生突变，且核糖体工程结合紫外诱变的诱变方式效果良好，能够快速有效的提高米尔贝链霉菌生物合成米尔贝霉素的能力。
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2018, 43(7): 817-823.目的 通过对达托霉素产生菌进行诱变选育，以及前体物补料发酵方式提高达托霉素的产量。方法 采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma, ARTP)技术对玫瑰孢链霉菌进行诱变，以癸酸铵和甘氨酸耐受作为选择压力进行菌株筛选，在摇瓶和100L发酵罐上进行癸酸铵流加补料试验确定最佳的发酵工艺。结果 经诱变选育获得1株突变株FIM-D1568摇瓶效价达到380mg/L，发酵单位较出发菌株提高了35.7%；通过优化100L发酵罐流加补料癸酸铵溶液工艺，使达托霉素发酵效价达到2276mg/L。结论 以ARTP为诱变源，甘氨酸及癸酸铵耐受性为选择性压力，可以快速筛选获得达托霉素高产菌；高产突变菌株在流加补料发酵工艺上优良性状得以发挥，发酵效价大幅提高。
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2018, 43(7): 824-830.目的 利用诱变结合抗性筛选方法选育多杀菌素高产菌株，并通过发酵培养基优化进一步提高多杀菌素产量。方法 分别确定链霉素、安普霉素和鼠李糖3种抗性的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)，然后以S.s1-4为出发菌株，通过紫外(UV)结合链霉素、安普霉素、鼠李糖抗性因子诱变选育，在此基础上利用亚硝基胍(NTG)结合上述抗性因子诱变选育，并利用响应面实验设计对发酵培养基中葡萄糖、糊精、棉籽蛋白3种成分进行优化。结果 出发菌株经过紫外照射30s，涂布于抗性平板上，筛选得到S.s2-21，S.s2-21再用NTG处理30min，涂布于抗性平板上，最终获得1株遗传性状稳定的菌株S.s3-37，产量为78.26mg/L，提高了45.71%；发酵培养基优化后，其产量达83.00mg/L。结论 利用紫外和NTG结合抗性复合诱变选育获得多杀菌素高产菌株是有效的，通过发酵培养基优化，其产量较出发菌株提高了54.55%，获得良好的效果。
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2018, 43(7): 831-836.目的 筛选获得阿维拉霉素A含量高的菌株，进一步提高绿色产色链霉菌(Streptomyces viridochromogene)发酵阿维拉霉素的水平。方法 对绿色产色链霉菌AVL4(S. viridochromogene AVL4)菌株原生质体制备及再生条件进行了优化，并在此基础上，采用ARTP诱变系统对其原生质体进行了诱变研究。结果 S. viridochromogene AVL4原生质体制备和再生的最佳条件为：以活化斜面转接至种子摇瓶培养24h的菌丝体为出发菌丝体，以SMM溶液作为渗透压稳定剂，采用12mg/mL的溶壁酶，30℃酶解反应60min。以原生质体为诱变对象，ARTP处理40s后的菌株经菌落形态初筛和摇瓶发酵复筛，获得一株编号S251的菌株，其摇瓶发酵阿维拉霉素的生物效价较出发菌株提高19.3%，其中，阿维拉霉素A占组分含量81%，较原始出发菌株AVL4含量提高6.4%，而且斜面连续转接五代遗传相对稳定。另外，成功实现变株S251的50L罐发酵验证，其产素水平最高达到4500U/mL，较对照菌株AVL4提高27.4%。结论 ARTP处理AVL4菌株原生质体，能够有效提高绿色产色链霉菌产阿维拉霉素的能力，获得的变株S251具有非常好的生产阿维拉霉素的工业化应用潜力。
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2018, 43(7): 837-840.目的 优化林肯链霉菌发酵培养基。方法 采用24孔板，对现有的两种发酵培养基中各因素进行考察，筛选出较优发酵培养基；在此发酵培养基基础上，采用L25(56)正交设计方法，对可溶性淀粉、葡萄糖、豆饼粉、硫酸铵、玉米浆和磷酸氢二钾这6个可能影响林可霉素发酵水平的因素进行效应评价。结果 得到最佳发酵培养基(g/L)：可溶性淀粉30，葡萄糖105，豆饼粉22.5，玉米浆1，氯化钠2.25，碳酸钙6，硫酸铵2.65，硝酸钾1，磷酸氢二钾0.5。结论 对优化后的发酵培养基进行孔板发酵验证，林可霉素的平均发酵产量达到2288μg/mL，比未优化组提高了42.03%。
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2018, 43(7): 841-846.目的 针对利奈唑胺日益严重的细菌耐药问题，将具有外排泵抑制作用的黄酮骨架引入利奈唑胺分子中，以提高抗耐药菌活性。方法 通过黄酮的氧烷基化反应，连接臂酯基的选择性水解，TBTU存在下的缩合反应，得到黄酮-利奈唑胺杂合体5；采用MTT法测定其抗菌活性，采用荧光分光光度法测定其外排率，用SYBYL软件研究5与靶点可能的结合模式。结果 化合物5抗金黄色葡萄球菌MIC50为0.39μg/mL，活性是利奈唑胺的近2倍；金黄色葡萄球菌对化合物5的外排率(13.1%)远低于其母体化合物利奈唑胺(49.0%)；化合物5和利奈唑胺具有相同的靶点结合模式。结论 化合物5对革兰阳性和阴性菌均具有优良的抗菌活性；对核糖体具有高亲和性；对外排泵具有显著抑制作用。
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2018, 43(7): 847-852.目的 优化万古霉素N4氨基还原烷基化的反应条件。方法 以万古霉素为原料，筛选还原烷基化反应的溶剂、还原剂、醛用量和反应温度，用HPLC方法测定原料和产物含量。结果 确立了以甲醇/二甲基亚砜=1:1为溶剂、硼烷叔丁胺为还原剂、1.3倍醛用量、缩合温度65℃、还原温度为室温的最优反应条件。结论 利用本文优化后的条件可以有效合成万古霉素N4氨基还原烷基化产物，研究结果为其他糖肽类抗生素的半合成衍生化提供技术基础。
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2018, 43(7): 853-862.中国药典2015年版中对硫酸庆大霉素原料和注射液标准进行了修订，其中在有关物质检查项下二者的限度数值相同。但由于原料和注射液中硫酸庆大霉素有关物质含量的含义和量纲(单位)不同，使得可能出现合格原料生产出不合格注射液的尴尬局面。本文从庆大霉素含量表征的特点入手，通过阐述原料和其制剂有关物质含量表述方式和量纲(单位)方面的差异，并以量效统一化研究为基础，讨论可以确保两标准限度间相互匹配的解决方案，从而为该品种的合理修订提供理论支撑。
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2018, 43(7): 863-865.目的 建立分子排阻色谱法测定头孢克洛胶囊中的高分子杂质。方法 采用球状亲水硅胶柱(TSK-GEL?G2500PWXL色谱柱，7.8mm×300mm, 7μm)，流动相为磷酸盐缓冲液(pH7.0)[0.02mol/L磷酸氢二钠溶液和0.02mol/L磷酸二氢钠溶液(61:39)]-乙腈(95:5)为流动相，流速为0.8mL/min，检测波长为265nm，以头孢克洛对照品外标法计算高分子杂质的含量。结果 头孢克洛在0.532~21.280μg/mL的浓度范围内，面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9999)；最小检出浓度为0.161μg/mL；高分子杂质与头孢克洛峰能有效分离，并先于主峰流出，方法专属性良好。结论 该方法适于测定头孢克洛胶囊中高分子杂质，灵敏度高，重复性好，操作简便。
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2018, 43(7): 866-869.目的 建立RP-HPLC法，测定克拉霉素干混悬剂的有关物质。方法 采用Agilent 1260 Infinity LC液相色谱仪，色谱柱为YMC C18(250mm×4.6mm, 5μm)柱，以0.033mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(55:45)(用85%磷酸溶液或2mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.4)为流动相，检测波长205nm，柱温50℃。结果 克拉霉素与9个已知杂质及其他未知杂质均能达到有效分离，克拉霉素及杂质E的线性范围分别为2~1000μg/mL(r=1.000)、0.9~6.75μg/mL(r=0.998)；供试品溶液在室温25℃下的12h基本稳定。结论 本方法灵敏，准确，专属性强，重现性好，可用于克拉霉素干混悬剂有关物质的测定。
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2018, 43(7): 870-874.目的 建立克拉霉素片的溶出曲线比较法，比较7家国产制剂与参考制剂在不同溶出介质中的溶出曲线。方法 采用桨法，转速为50r/min，分别用pH6.0、pH6.8、pH7.0缓冲液为溶出介质，参考2015年版《中国药典》克拉霉素含量测定项下的色谱条件和系统适用性，测定累计溶出率，采用单点判定法和相似因子法比较7家国产制剂与参考制剂溶出曲线的相似性。结果 2家国产制剂在pH6.0缓冲液中的溶出曲线与参考制剂相似，1家国产制剂在pH6.8缓冲液中的溶出曲线与参考制剂相似，3家国产制剂在pH7.0缓冲液中的溶出曲线与参考制剂相似。结论 采用pH6.0、pH6.8、pH7.0缓冲液作为溶出介质，可有效区分不同工艺的克拉霉素片；国产制剂与参考制剂的溶出曲线在上述溶出介质中存在一定差异。
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2018, 43(7): 875-880.目的 总结抗生素微生物检定法(管碟法)中影响测定结果准确性的常见系统误差并加以控制。方法 梳理10余年来中检院仲裁复验的案例，对共性问题进行整理，找出可能原因，并采用单一变量实验设计的方式加以确证。结果 估计效价和浓度比的错误计算、点样顺序和点样时间规范性和熟练程度、试验标准菌株的变异均会对管碟法测定结果产生影响。结论 通过细化实验操作规范，可以避免或尽量消除此类系统误差的影响。
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2018, 43(7): 881-886.目的 建立有效、简便的复方氯己定地塞米松膜微生物限度和控制菌检查方法。方法 采用平皿法、中和法和中和法结合1:20稀释法、中和法结合1:50稀释法对复方氯己定地塞米松膜进行微生物限度方法适用性研究，并采用常规法、中和法、中和法结合稀释法、中和法结合薄膜过滤法等11种方法进行控制菌方法适用性研究。结果 建立复方氯己定地塞米松膜微生物限度和控制菌检查方法。结论 采用薄膜过滤法较稀释法，以及将中和剂添加到增菌液中较添加到稀释液中更能有效去除药物制剂的抑菌活性。
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2018, 43(7): 887-892.目的 建立石榴籽油自纳米乳化系统的抗菌活性检测方法，解决自纳米乳化系统在高浓度培养液中自组装能力差、培养液背景吸收大及酵母浊度测定不稳定等问题。方法 采用浊度法测定抗菌活性，考察培养基种类、浓度、细菌密度、培养时间、培养方式及测定前的灭菌方法等条件。结果 大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌所用培养基浓度调整为全培养液的80%，细菌密度为104 CFU/mL，培养时间12h；酵母所用培养基浓度调整为50%，并加入0.2%琼脂助悬，密度104CFU/mL，摇床150r/min培养8h。培养结束后，均使用84消毒液灭菌。结论 采用本法测定石榴籽油自纳米乳化系统的抗菌活性，样品自纳米乳化完全，背景干扰小，操作简单，浊度测定值重复性好，值得推广应用。
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2018, 43(7): 893-900.目的 应用Box-Behnken响应面分析法优化两性霉素B脂质体-微球的制备条件。方法 采用乳化-相分离法制备包载两性霉素B脂质体的海藻酸钠微球，通过单因素实验确定显著影响微球成球性的因素，利用Box-Behnken响应面分析法考察氯化钙浓度、司盘80用量及搅拌速度对微球粒径、跨距、包封率、1h释放量及72h释放量的影响，筛选最佳制备工艺，并进行体外抑菌试验。结果 最佳制备工艺条件为氯化钙浓度41%，司盘80用量4.3%，搅拌速度678r/min。此优化条件下，制得的两性霉素B脂质体-微球平均粒径为8.0μm，药物包封率大于80%，体外抑菌试验结果显示载药微球具有较好的抑菌能力。结论 Box-Behnken响应面分析法可有效平衡各因素之间的相互影响，适用于两性霉素B脂质体-微球的制备工艺筛选。
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2018, 43(7): 901-904.目的 研究本院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)中碳青霉烯酶基因流行状况，为治疗和控制其感染提供参考依据。方法 收集抚州市第一人民医院2015—2016年间临床分离的CRAB非重复株，Vitek-2 Compact型全自动微生物分析仪进行菌株鉴定和药敏实验，改良Hodge试验进行碳青霉烯酶初筛，EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶，采用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因。结果 69株CRAB对替加环素耐药率为1.4%，复方磺胺甲噁唑耐药率81.2%，其他抗生素耐药率均在90%以上，全部表现为多重耐药。改良Hodge试验阳性55株(80.0%)，EDTA协同试验未检出阳性菌株。基因扩增KPC酶基因38株(55%)，OXA-23酶基因68株(98.6%)，OXA-51酶基因69株(100%)，未检测出IMP-1、VIM-1、NDM-1、SIM-1、OXA-24和OXA-58等酶基因。结论 本院69株CRAB耐药性非常严重，OXA-23和OXA-51型酶基因是其携带的主要碳青霉烯酶基因。
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2018, 43(7): 905-909.目的 研究耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染特征、预后及危险因素。方法 回顾性病例对照1:4配比分析2012年1月－2017年2月，耐碳青霉烯类与非耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染患者预测耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染的危险因素。结果 耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌常见感染部位是呼吸道感染，占59.80%，主要分布在重症监护室(ICU)(48.04%)和神经外科(26.47%)；机械通气、手术治疗、感染前使用抗菌药物、碳青霉烯类抗菌药物、多药联类和入住ICU是耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌组感染的独立危险因素，治疗有效率仅为59.80%。结论 耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌感染形势严峻，预后差；注意呼吸道重症感染的防控、减少不必要侵入诊疗、合理使用抗菌药物等是减少其感染，提高疗效措施。
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2018, 43(7): 910-915.目的 评价替加环素、多黏菌素对产KPC酶肺炎克雷伯菌的体外抗菌效应研究，指导临床正确选择并合理使用抗菌药物。方法 收集2012—2016年期间分离自温州医科大学附属第三医院临床样本中对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌109株，采用Vitek-2 compact和Vitek MS进行菌种鉴定及药敏试验；采用聚合酶链反应(PCR)法检测菌株的KPC酶耐药基因并采用琼脂稀释法药敏试验分别检测替加环素、多黏菌素等药物的单药最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)值。结果 所分离的109株均为产KPC-2肺炎克雷伯菌，经过Vitek-2 compact和KB法试验可知109株肺炎克雷伯菌对阿米卡星的耐药率为82.57%，对亚胺培南、美罗培南等其他药物的耐药率均为100%。琼脂稀释法药敏结果显示109株肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南耐药率均为100%；对阿米卡星耐药率为89%；对替加环素的敏感率为65.1%，29.4%中介；对多黏菌素的敏感率为100%。结论 产KPC-2型肺炎克雷伯菌对多黏菌素和替加环素较为敏感，可作为临床用药参考。
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2018, 43(7): 916-920.目的 评价美罗培南用于治疗细菌性脑膜炎时的疗效和安全性。方法 以“脑膜炎”、“美罗培南”“美洛培南”为关键词，在Pubmed、Cochrane library、Embase、CNKI、VIP、Wanfang数据库中检索相关文献，于纳入文献中提取所需数据后采用RevMan5.3软件对结果进行分析。结果 ①美罗培南治疗细菌性脑膜炎有效率与头孢类药物有统计学差异(RR=1.24, 95%CI[1.11,1.39], P=0.0001)；②美罗培南治疗细菌性脑膜炎时不良反应发生率与头孢类药物无统计学差异(RR=1.33, 95%CI[0.98,1.82], P=0.07)。结论 相比于头孢类药物，美罗培南由于更优的疗效及相当的安全性可以被应用于细菌性脑膜炎的治疗。
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2018, 43(7): 921-926.目的 通过体外抑菌实验，评价香叶醇单独使用以及与3种β-内酰胺类抗生素(阿莫西林、头孢氨苄及头孢吡肟)联合使用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus, MRSA)的抑制效果。方法 采用微量稀释法测定香叶醇与3种β-内酰胺类抗生素的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)及最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration, MBC)；微量棋盘法测定香叶醇与3种β-内酰胺类抗生素的分级抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration, FIC)。结果与结论 香叶醇具有明显的体外抗MRSA活性，MIC和MBC分别为0.34~0.69mg/mL和0.69~10.76mg/mL。联合药敏试验发现香叶醇与3种β-内酰胺类抗生素联合使用FIC指数集中分布在≤0.5和0.5~1；能够增强β-内酰胺类抗生素的活性，降低其用量，使其MIC50和MIC90降低为单独用药的1/8~1/4和1/4~1/2。
