摘要：目的 分析近期某院ICU病房中碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP)分离株的序列分型、耐药基因、毒力基因和膜孔蛋白丢失或突变的情况。方法 使用MALDI-TOF/MS系统对菌株进行鉴定，Vitek 2 Compact和纸片扩散法进行抗菌药物敏感性试验，通过聚合酶链式反应PCR技术检测碳青霉烯酶基因，通过Illumina NovaSeq X Plus平台完成全基因组测序。结果 4株CRKP均为ST15型，SNP数量小于50。药敏结果显示对头孢菌素类、传统β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂、氟喹诺酮类耐药，对头孢他啶/阿维巴坦、替加环素、多黏菌素敏感。对亚胺培南均敏感，最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration，MIC)均≤0.25 mg/L，对美罗培南及多利培南达到中介或耐药水平，MIC范围是2~4 mg/L，厄他培南均耐药，抑菌圈直径为6 mm。PCR检测常见碳青霉烯酶基因均为阴性。全基因组测序检测到4个编码β-内酰胺酶的耐药基因，包括bla_CTX-M-15、bla_DHA-1、bla_SHV-106和bla_OXA-1基因。在OmpK36中检测到多位点突变(D49S、L59V、G189T、F198Y、V202L、F207Y、A217S、T222L、D223G、Q227K、L229A、E232R、H235N、A280V、N304E、R345H、S346N、G133_G134insGD、A183_T184insLSP和N225_Q226insS)。在OmpK37中发现两处突变(Y79_N80insN和I128M)。4株CRKP均检出药物外排泵基因acrAB、肠杆菌素编码基因(ent和fep)、耶尔森菌素编码基因(irp1/2和ybt)等多种毒力基因。结论 近期ST15型CRKP携带多种β-内酰胺酶基因合并OmpK36和Ompk37突变的分离株在我院ICU克隆传播，在临床实践中应合理应用抗生素并加强感染控制措施。

摘要：目的 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)因耐药性和强大的生物膜形成能力成为临床治疗难题。本研究通过高密度转座子突变库，揭示基因PA5291(betT2)在生物膜形成中的作用，拓展PA生物膜机制的新视角。方法 从临床分离的耐碳青霉烯PA菌株构建转座子突变库，筛选出生物膜形成减弱的突变株。利用Cubes-seq定位PA5291基因，并通过实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR，qPCR)比较其在生物膜与浮游菌状态下的表达差异。构建PA5291过表达和敲减株，结合结晶紫法、生长曲线和碘化丙啶染色评估其在生物膜形成中的作用。结果 构建的转座子突变库覆盖超22,000个突变体，插入模式随机，增强了遗传多样性。通过筛选4607株突变体，鉴定出13株生物膜形成缺陷突变株，揭示多个关键基因。PA5291被确认是生物膜形成的核心基因，并预测其通过调节外膜囊泡影响生物膜结构。在不同临床背景下，PA5291在生物膜状态下的表达显著高于浮游菌，突显其关键作用。功能实验表明，PA5291敲减显著抑制生物膜形成。结论 本研究确认PA5291基因在铜绿假单胞菌生物膜形成中的关键作用，为丰富生物膜调控机制提供新思路。