目的    了解中国广东地区2010—2016年淋球菌对头孢曲松的敏感性以及相应菌株的淋球菌多抗原测序分型(NG-MAST)基因型别。方法    2010—2016年在广东省疾病预防控制中心收集的285株淋球菌，经分离纯化及鉴定后，采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的琼脂稀释法测定其对头孢曲松的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)；菌株培养后利用试剂盒提取DNA，并进行淋球菌多抗原测序分型(NG-MAST)。结果    本次测试的285株淋球菌除1株MIC>0.25μg/mL外，其他都属于敏感菌株(CLSI敏感标准为≤0.25μg/mL)，MIC≥0.06μg/mL的菌株比例为63.2%，其中2016年度MIC≥0.06μg/mL菌株比例为44.4%，2010年MIC≥0.06μg/mL菌株比例为70.6%。NG-MAST分型研究显示，285株淋球菌共有166个型别，菌株多样性较高，其中73种为已知型别，93种为新型别。测定的所有菌株中主要包括ST568(n=13)，ST270(n=9)，ST421(n=7)，ST2288(n=5), ST1731(n=4)，ST1766(n=4)，ST1866(n=4)，ST1870(n=4)，ST1053(n=4)，ST2318(n=4)，ST5990(n=4)，ST1614(n=4)，ST1866(n=3)等。相同NG-MAST型别的菌株具有相同或相近的MIC值。结论    广东地区淋球菌对头孢曲松MIC≥0.06μg/mL菌株比例较高，需要对此进行长期监测。7年间菌株的优势型别有较大变化，显示该地区性网络可能发生较大波动。NG-MAST分型可以作为分子生物学标记用于淋球菌耐药监测。

仿制药质量与疗效的一致性评价工作是当前国内医药界的最热门话题。本文基于历年国家评价性抽验的结果，客观分析国产抗生素药品的质量现状，探讨国产仿制药与原研药品的主要质量差距，为国内开展抗生素药品的质量与疗效的一致性评价工作提供参考。

运用响应面法优化了多拉菌素生产菌的发酵培养基。首先通过单因素实验发现正效应因子；接着采用Plackett-Burman(P-B)设计确定了黄豆饼粉、麦芽糊精和MgSO4是影响多拉菌素产量的显著因素；然后利用最陡爬坡试验分别找到3个因素的合理浓度范围；并进一步利用中心组合设计优化了黄豆饼粉、麦芽糊精和MgSO4的最佳浓度配比。筛选并优化得到了最适的培养基浓度为黄豆饼粉17.30g/L，麦芽糊精77.30g/L，MgSO4 1.50g/L，基于此，效价达到了589.43mg/L，验证实验结果与模型预测基本吻合，优化后的培养基工艺能够提升多拉菌素发酵单位20.37%。5L反应罐上发酵过程生理代谢参数变化表明：优化的培养基能够加促菌体的比生长速率，维持较高的氧消耗速率和产物合成速率，大幅度提升了多拉菌素的发酵生产效率。

目的    以苯甲酸为原料，经4步反应合成一系列N-取代苯基-5-取代苯基-3H-1,2,4-三氮唑-3-硫酮化合物并研究其抗菌活性。方法    基于课题组前期对新型潜在三唑类抗菌化合物6h的作用机制研究，筛选多个侧链基团，使用乙醇和碳酸钠作溶剂改善最后一步反应条件，通过硅胶柱色谱分离纯化目标化合物，合成一系列1,2,4-三唑类化合物并采用质谱(MS)和1H NMR、13C NMR进行结构表征。通过琼脂扩散法初步筛选所有化合物对肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌3种常见菌株的抗菌活性，并通过微量稀释法进一步测定它们的最小抑菌浓度(MIC值)。结果    合成17个含有卤代苯基和其他侧链基团的目标化合物，其MS以及核磁共振谱图数据表明所有化合物结构正确。抗菌活性初步筛选可知化合物6a、6b、6d、6f、6g、6h、6k、6m和6p等9个化合物具有不错的抑菌能力，其MIC测试结果表明，大部分化合物对所测菌株的MIC值在25~100μg/mL范围内。尤其是化合物6h和6k对肺炎克雷伯菌的MIC值达到25μg/mL，抑菌活性与对照药物氨苄西林相当。结论    在前期作用机制研究基础上，通过对构效关系的阐述，发现一些侧链片段如间位卤代苯基或对位卤代苯基、三氟甲基苯基等具有吸电子基团的苯基、吡啶基等对1,2,4-三唑类衍生物的抗菌活性有明显增强作用，证实侧链基团与受体蛋白形成特异性协调作用和氢键作用从而发挥衍生物的抗菌活性。

目的 了解我国西部地区2016—2017年产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的耐药及分布特点，为临床抗感染治疗提供依 据。方法 采用全自动微生物分析仪按统一方案对西部地区10家医院临床分离菌进行药物敏感性实验，KB纸片法进行补充。依 据2017版CLSI标准判读结果，并用WHONET 5.6软件进行统计分析。结果 收集2016—2017年间10所医院临床分离CRE菌株共 1845株，位列前5位的肠杆菌科细菌是肺炎克雷伯菌953株(52%, 953/1845)、大肠埃希菌266株(14%, 266/1845)、阴沟肠杆菌264 株(14%, 264/1845)、弗氏柠檬酸杆菌69株(4%, 69/1845)、奇异变形菌62株(3%, 62/1845)。药敏试验结果显示，CRE菌株对大多数 临床常用抗菌药物呈高度耐药，除了对替加环素和多黏菌素B的耐药率为5%和8%、对阿米卡星的耐药率为32.2%，对其他抗菌 药物的耐药率大多在80%~97%。CRE儿童分离株对阿米卡星、环丙沙星、多黏菌素和替加环素的耐药率低于成人分离株。结论 CRE菌株对临床上常用的抗菌药物大多呈高度耐药，应加强细菌耐药性和医院感染的监测及抗菌药物的有效管控，遏制CRE菌 株在医院传播流行。

病原菌对抗生素的耐受对临床治疗造成严重威胁。CRISPR-Cas系统具有高度的靶标基因序列特异性与方便的可编程性，已被尝试用来控制耐药病原细菌。用噬菌体传递CRISPR-Cas系统切割耐药细菌特有靶标，可恢复其对抗生素的敏感或直接致其死亡。更吸引人的应用则是用CRISPR-Cas系统编辑噬菌体基因组，使其具备期望的抗菌性能。

缩酚酸肽(depsipeptide)是一类天然产物活性物质，包含酯键的一类多肽，具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗疟和抗血栓等生物活性。本文综述了缩酚酸肽类化合物的来源、生物活性、作用机制以及临床研究等信息，并展望缩酚酸肽类药物研究开发的前景。

角果木是长期生长在热带、亚热带潮间带的典型真红树植物，因从其中分离到一系列具有优良抗肿瘤活性的萜类成分使得角果木内生真菌及其次级代谢产物的研究也越来越受到关注。本文对近10年来从角果木内生真菌中分离到的72个化合物进行结构特点和生物学功能评述，以期概述角果木内生真菌代谢产物的最新研究成果和进展，为角果木内生真菌的深入研究和开发利用提供参考。

2017年美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市新药46个，其中有抗菌药物4个，抗病毒药物3个。本文根据FDA批准的新药说明书以及相关文献和专利情况，简要介绍德拉沙星(delafloxacin)、复方美罗培南(meropenem)、塞克硝唑(secnidazole)、奥泽米星(ozenoxacin)、复方三联抗丙型肝炎制剂(vosevi)、复方抗丙型肝炎制剂(mavyret)和莱特莫韦(letermovir)的药物的概况、合成技术路线、适应症、作用机制、剂型规格、不良反应和合成路线等相关情况。严格来说，塞克硝唑(secnidazole)是一仿制药物，在欧洲已经上市近30年，在中国上市也有10年以上。

近年来人们研制出一种新的大环内酯类抗生素,即酮内酯类抗生素。第一代红霉素由于对胃酸的不稳定性,致使了第二代的阿奇霉素、罗红霉素等的出现,而且取得了很好的临床效果。但是近年来抗菌形势更加严峻,促使了第三代酮内酯类的研发,其代表药物为泰利霉素(HMR-3647)和喹红霉素(ABT-773),本文就其合成路线、药效学、构效关系等一一加以介绍。

本文以长效重组人胰岛素原类似物(SIIA-0801)的大肠埃希菌工程菌为研究对象,针对采用高细胞密度培养技术表达包涵体重组融合蛋白的关键参数,重点研究了诱导培养基成份(包括碳源、氮源、无机盐、微量元素)、种子细胞密度、IPTG诱导剂的加入量及诱导时间,诱导温度等因素与包涵体表达产量的相关性。结果发现其融合蛋白的最佳表达培养基:1.5%蛋白胨,1%酵母粉,0.5%NaCl,0.8%葡萄糖和0.2%磷酸盐缓冲液(22mmol/LKH2PO4,40mmol/LK2HPO4)。最佳诱导表达条件为:25%接种量,诱导温度37℃,接种培养1h后添加0.5mmol/L IPTG,继续诱导培养5h,发酵培养的总周期为6h。优化后的培养条件比传统的LB培养基及培养方法,其产量提高了6倍多。该结果为长效重组人胰岛素原类似物(SIIA-0801)后续的生产工艺研究提供了重要的参考依据。

考察了不同温度(29~34℃)对红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea)合成红霉素(erythromycin)的影响,对不同温度下的发酵过程进行动力学特性分析,在此基础上提出了红霉素合成的变温培养方法:延滞期及对数期初期温度控制在33℃,发酵中期32℃,后期降温至29℃的条件下进行培养。采用此变温培养进行发酵,红霉素的化学效价和生物效价比恒温32℃培养对照组分别提高了24%和11.1%。

本文就头孢唑肟钠生产过程中影响其产品质量和收率的各种因素进行了单因素实验和正交实验,旨在获得生产头孢唑肟钠的最佳工艺条件。结果表明:生产头孢唑肟钠的最佳条件为反应温度低于30℃,无水碳酸钠:头孢唑肟酸(质量比)=0.15∶1.0,反应时间2h,结晶前控制pH值为6.7,乙醇:头孢唑肟酸=30ml∶1.0g,乙醇滴加速度450 ml/h,养晶时间2h。产品收率达95.5%,产品质量满足药典标准。

目的采用HPLC-ELSD法测定在伏格列波糖生产中的中间体及产物。方法采用ALLTECH ELSD2000(95℃,3.0L/min),SUPELCOSIL LC-NH2(25cm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(0.05mol/L醋酸铵)(80:20)为流动相,流速1.0 ml/min。结果Valiolamine在10.11~808.80μg范围内呈线性,平均回收率为100.8%,RSD为2.52%(n=6);voglibose在8.10~648.00μg范围内呈线性,平均回收率为99.1%,RSD为2.18%(n=6);二者分离度为3.0。结论本法简便,快捷,结果可靠,重现性好,可用于伏格列波糖生产过程的质量控制。

目的建立有效的注射用氨苄西林钠舒巴坦钠有关物质检测方法。方法采用HPLC梯度洗脱法,色谱柱为Phenomenex C18(2)型Luna色谱柱,以0.02mol/L磷酸二氢钠溶液pH(4.0±0.1)为流动相A、乙腈为流动相B;流速为1.0ml/min;检测波长为230nm和254nm,采用双波长检测分区域计算。对舒巴坦主峰前的杂质峰,采用230nm的峰面积值按舒巴坦计算其含量;对舒巴坦主峰后的杂质峰,采用254nm的峰面积值按氨苄西林计算其含量。结果采用梯度洗脱方式能有效检测出氨苄西林二聚物、舒巴坦青霉胺等杂质;不同来源的杂质具有明显分区,与氨苄西林有关的杂质主要集中在舒巴坦主峰后,而与舒巴坦有关的杂质则集中在舒巴坦主峰前;采用双波长分区域检测杂质含量,可以将复方制剂中的有关物质含量同其原料氨苄西林钠和舒巴坦钠中的有关物质含量相联系。各杂质在不同波长下响应值不同。结论改进后的方法可较好的分离氨苄西林钠和舒巴坦钠来源的各主要杂质,真实反映药品质量,有助于发现目前产品中的质量问题,进而促使产品质量的提高。

目的研究我国临床分离高水平耐红霉素的屎肠球菌中红霉素耐药基因及其水平转移情况。方法采用PCR法检测红霉素耐药基因ermB和mef,转座子Tn917相关基因tnpA。采用质粒酶切图谱分析耐药菌同源性,采用固体培养基传递法和液体培养基传递法研究红霉素耐药基因水平转移情况。结果90株高水平红霉素耐药屎肠球菌中ermB基因阳性率为85.6%(77/90),mef基因均为阴性,15.6%(14/90)tnpA基因阳性的肠球菌中ermB基因均为阳性。质粒酶切图谱显示除来自同家医院的4株菌质粒酶切图谱相同外,其余菌株质粒酶切图谱差异明显。14.3%(11/77)菌株携带的ermB基因在屎肠球菌间可通过固体传递水平转移,2.6%(2/77)菌株携带的ermB基因在屎肠球菌间液体环境中水平转移。13株接合子经过PCR鉴定,ermB基因均为阳性,但tnpA基因皆为阴性。结论高水平耐红霉素的屎肠球菌ermB基因携带率较高,且该基因可在屎肠球菌间水平转移,可水平转移的ermB基因可能位于其它非Tn917转座子和/或接合性质粒上。14株屎肠球菌ermB基因可能存在于转座子Tn917内。这些菌株间大多没有同源性。

目的构建新型β-内酰胺酶CTX-M-38的表达载体。方法应用PCR扩增CTX-M-38基因全长编码序列,经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得894bp的产物,重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/CTX-M-38]构建成功。蛋白pI为8.4。结论β-内酰胺酶CTX-M-38在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。

目的了解临床分离鲍曼不动杆菌中qnr基因和ESBLs基因的分布及其耐药特征。方法采用PCR法对115株鲍曼不动杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因筛查,并用PCR法检测qnr阳性菌株SHV、TEM、CTX-M-14及CTX-M-3型ESBLs基因;用琼脂对倍稀释法测定15种抗菌药物对qnr阳性株的MIC值。结果115株鲍曼不动杆菌中,2株(1.74%)细菌检出qnrB基因;qnr阳性菌株同时检出SHV、CTX-M-14、TEM、CTX-M-3型ESBLs基因。1株qnr阳性菌株对4种喹诺酮类耐药,1株对左氧氟沙星及莫西沙星中介,对环丙沙星和洛美沙星耐药;2株阳性菌除对亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦敏感外,对其他的β-内酰胺类抗菌药物均耐药。结论临床分离鲍曼不动杆菌中存在qnrB基因,qnr阳性株同时含有ESBLs基因,且呈多重耐药,临床应加强监测。

目的调查7种抗菌制剂外排泵基因(smr-2、emrB、emrD、emrE、mdfA、tehA、qacE△1)在一株大肠埃希菌尿潴留患者尿液分离株(ECO-024)中的存在情况。方法大肠埃希菌ECO-024于2009年2月分离自宁波市第一医院一例尿潴留患者的尿液标本,采用聚合酶链反应(PCR)检测7种外排泵基因。结果ECO-024共检出6种外排泵基因:emrB、emrD、emrE、mdfA、tehA、qacE△1,只有smr-2未能检出。结论同时检测这7种抗菌制剂外排泵基因是国内首次报道。其中有6种基因在大肠埃希菌尿液分离株中被检测到,这或许是导致分离株呈多重耐药的一个重要原因。在大肠埃希菌中检出mdfA、emrB、emrD、emrE基因为国内首次报道。