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2023年, 48卷, 第01期
刊出日期：2023-01-25
非临床药效学研究技术指南专题
综述
微生物药物筛选
分析质控与制剂
药理与临床
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全选|
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非临床药效学研究技术指南专题2023, 48(01): 1-7.摘要：抗菌药物药效学非临床研究属于抗菌药物临床前研究的重要内容，是指研究药物在体外或体内抑制病原菌生长和
复制(抑菌)或使病原菌死亡(杀菌)的作用，主要包括抗菌药物对细菌的最低抑菌浓度、最低杀菌浓度、杀菌曲线、抗生素后效应
和半数有效剂量等测定。本技术指南对抗菌药物药效学非临床研究的常用术语、研究内容及方法进行论述，旨在为创新抗菌药
物，包括化学药物、生物药物和中药的临床前药效学研究提供参考。 -
非临床药效学研究技术指南专题2023, 48(01): 8-12.抗菌增敏药是一类本身并不具有抗菌作用的药物，但是其与抗菌药物联合应用后可增加抗菌药物的抗菌活性。抗菌增
敏药是抗菌药物研究领域的新的研究方向，它的非临床研究的药效学内容同样包括体内和体外两个方面。在体外研究中，评价指
标除包括与其他单一抗菌药物评价相同的指标如MIC、MBC、KCs、PAE和ED50，还需要做联合用药后联合抑菌指数(FICI)和联合
时间-杀菌曲线的研究。在体内研究中，评价指标同单一抗菌药物评价指标，但是需要特别注意联合用药药物的配伍剂量的选择。
本技术指南对抗菌增敏药非临床研究药效学的内容及方法进行论述，旨在为抗菌增敏药的临床前药效学研究提供参考。 -
非临床药效学研究技术指南专题2023, 48(01): 13-18.β-内酰胺酶抑制剂复方制剂在临床上被广泛应用于治疗耐药菌所致感染，由于早期β-内酰胺酶抑制剂的抑酶谱较
窄，抑酶谱更广泛的酶抑制剂在不断研发之中。与一般抗菌药物临床前研究不同，β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的临床前研究需
明确β-内酰胺类药物或酶抑制剂本身的抗菌谱与抗菌活性，尤其是明确酶抑制剂是否具有抗菌活性。需要确定合适的β-内酰胺
类药物与酶抑制剂复方制剂，以及适用的不同酶型的目标病原菌。本文主要介绍新型β-内酰胺酶抑制剂复方制剂临床前研究方
法。临床前研究阶段的β-内酰胺酶抑制剂复方制剂研究包括体外研究和体内研究两部分，前者主要为体外药效学研究和体外药
动学/药效学(pharmacokinetic/pharmacodynamic, PK/PD)研究，常用研究方法包括β-内酰胺类药物和β-内酰胺酶抑制剂复方制剂最
低抑菌浓度测定、最低杀菌浓度测定、抗生素后效应测定及时间杀菌曲线。后者主要为动物药动学研究、感染动物药效学研究
和感染动物药动学/药效学研究。在动物药动学/药效学研究中，需考虑β-内酰胺类药物与酶抑制剂的相互影响。这些研究方法的
应用旨在阐明β-内酰胺酶抑制剂复方制剂两组分药效学特点、药动学相似与否、PK/PD指数及其临床前PK/PD靶值，为进入临
床试验阶段目标适应症及剂量选择提供依据。 -
非临床药效学研究技术指南专题2023, 48(01): 19-24.摘要：研发新型抗结核药物极具挑战性，难度大，周期长，非临床研究的数据是开展临床试验的前提。全面充分的结核分
枝杆菌体外和在动物体内的药效学评价是临床试验前的重要步骤和关键内容。本技术指南主要适用于治疗由结核分枝杆菌引起
的肺结核病药物的研发，旨在为创新抗结核药物的临床前药效学研究提供参考。 -
非临床药效学研究技术指南专题2023, 48(01): 25-31.摘要：本文是抗菌药物(包括抗细菌药物、抗真菌药物、抗结核菌药物等)非临床研究技术指南系列文章之一，是由中国药
理学会化疗药理专委会组织国内从事相关研究的专家编写而成。本文主要针对真菌生物学特点，介绍了抗真菌药物非临床研究
中药效学之体外药效学研究、体内药效学研究、体内PK/PD研究、抗真菌作用机制研究等方面的技术要点，其中省略了体外药
效学研究中与抗细菌药物类同的内容。期望能为抗真菌药物非临床药效学研究提供参考。 -
综述2023, 48(01): 32-40.细菌耐药性是治疗细菌感染类疾病失败的主要原因，寻找高效、低毒的逆转细菌耐药性策略成为了治疗细菌感染的
研究热点。本文就逆转细菌耐药性机制与策略等进行综述，为解决细菌耐药性问题、开发新型抗生素提供研究方法与思路。 -
综述2023, 48(01): 41-48.耐药鲍曼不动杆菌导致的院内感染暴发给临床治疗带来极大挑战，因此迫切需要开发新型抗菌药物。本文就近年来
研究开发或批准上市治疗耐药鲍曼不动杆菌的抗菌新药，包括β-内酰胺酶抑制剂、头孢菌素类、氨基糖苷类、喹诺酮类及新型
抗菌药物进行综述。 -
微生物药物筛选2023, 48(01): 49-53.目的 合成透明质酸(HA)-绿原酸(CGA)的水溶性缀合物HA-CGA并对其结构进行表征，并比较该缀合物与单体药
物CGA的抗菌活性。方法 将HA溶于水中，用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)将其活化，然后加入溶于
DMF的CGA进行酯化反应，最后将反应溶液在水中透析除杂，冻干，得到缀合物HA-CGA，并采用核磁共振氢谱法、红外光谱
法对HA-CGA结构进行表征；采用平板计数法来比较CGA和HA-CGA对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等2种细菌的抑制作用。结
果 CGA和HA-CGA对2种细菌均有不同程度的抑制作用，其中HA-CGA抗菌活性强于CGA。结论 通过HA对CGA的结构进行
修饰，增加了CGA的水溶性，进一步提高了CGA的抗菌性能。 -
微生物药物筛选2023, 48(01): 54-61.目的 探究赶黄草水煎液在体外对金黄色葡萄球菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜(MRSA)形成的影响。
方法 采用微量肉汤稀释法测定赶黄草水煎液对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀
菌浓度(MBC)，根据MIC和MBC绘制杀菌曲线，采用结晶紫染色法和激光共聚焦观察赶黄草水煎液对SA和MRSA生物膜形成的
影响，并通过测定胞外多糖和胞外DNA的含量研究赶黄草水煎液破坏SA和MRSA生物膜的作用方式。结果 赶黄草水煎液对
SA的MIC和MBC分别为1.36和2.71 mg/mL，对MRSA的MIC和MBC为2.71和5.73 mg/mL；赶黄草水煎液可使SA和MRSA均生长
受到抑制，抑制生物膜的形成、减少胞外多糖和胞外DNA的释放。结论 赶黄草水煎液对SA和MRSA具有良好的抑菌作用，可
通过抑制胞外多糖和DNA的分泌破坏生物膜的形成。 -
分析质控与制剂2023, 48(01): 62-68.目的 对注射用头孢呋辛钠中4个未公开报道的降解杂质进行研究，并推导其化合物结构。方法 采用YMC C8色谱
柱(4.6 mm×50 mm, 3 μm)；以0.005 mol/L醋酸铵溶液-乙腈为流动相梯度洗脱，流速0.5 mL/min。离子源：电喷雾离子(ESI)源。
结果 注射用头孢呋辛钠中4个未知杂质得到有效分离，使用Q EXACTIVE高分辨质谱确定了杂质的分子量，并依据头孢类化合
物的裂解及降解理论推测出其结构与形成机理，与头孢类已知杂质相异，杂质Ⅳ为本品特有的氨降解杂质。结论 本方法操作
简便，灵敏度高，可用于评价注射用头孢呋辛钠中的未知杂质，同时，研究结果为注射用头孢呋辛钠的质量标准制订和质量控
制提供了重要的参考依据。 -
分析质控与制剂2023, 48(01): 69-78.目的 制备硫酸阿米卡星多囊脂质体(amikacin sulfate multivesicular liposomes, AMK-MVLs)，对其进行质量评
价，并考察了其体外抗菌活性。方法 采用复乳法制备AMK-MVLs混悬液Ⅰ，Box-Behnken效应面法优化筛选最佳处方，采
用生理盐水洗涤后调整药物浓度得AMK-MVLs混悬液。采用光学显微镜、激光粒度仪、差示扫描量热(differential scanning
calorimeter，DSC)考察制剂的理化性质，采用透析法考察其体外释放规律，通过微量稀释法初步考察其体外抗菌活性。结
果 优化得到AMK-MVLs混悬液Ⅰ的最佳处方为：大豆磷脂与胆固醇质量比为1.91:1，三油酸甘油酯用量为1.02%，PVA用量为
0.62%。AMK-MVLs呈堆叠有无数囊泡的非同心球状，AMK-MVLs混悬液包封率(87.12±1.55)%，平均粒径为11.93 μm。DSC
结果表明，AMK以无定型状态存在于脂质体内。体外释放结果显示AMK-MVLs混悬液在72 h时释药约80%。体外溶血实验表
明，AMK-MVLs脂质体粒子浓度低于400 μg/mL时无溶血风险。体外抗菌实验结果显示，相较于AMK溶液，AMK-MVLs混悬液对E. coli、
P. aeruginosa、S. aureus 3种细菌具有更好的抗菌效果。结论 成功制备了一种硫酸阿米卡星多囊脂质体，其粒径分布均匀、包
封率高，释药规律符合Higuchi动力学模型，具有增强的抗菌活性。 -
分析质控与制剂2023, 48(01): 79-86.目的 建立多中心切割(MHC)二维高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(2D-HPLC-QTOF)法分离和推断表柔比星脂质
体制剂中未知杂质的方法。方法 一维液相色谱采用Symmetry-C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)为色谱柱，以乙腈和甲醇(6:1)为流
动相A，以加入十二烷基硫酸钠的磷酸缓冲液为流动相B，流动相A与流动相B体积比为57:43进行等度洗脱；二维高效液相色谱
采用Agilent Eclipse-C18 (50 mm×2.1 mm，1.8 μm)为色谱柱，以0.1%的甲酸水和乙腈为流动相，采用梯度洗脱。将一维液相色谱
条件下分离的杂质峰进行多中心切割储存在定量环中，并转移至二维进行分离，以四极杆飞行时间质谱(QTOF)进行结构推断。
结果 该方法可以使表柔比星与杂质峰较好地分离，并且可以得到高质量杂质峰进行结构推断。在表柔比星脂质体制剂中对6
个未知杂质进行有效的推断。结论 建立的多中心切割二维高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法可高效准确的分离并推断表柔
比星脂质体制剂中的未知杂质，特别是微量和难以分离的杂质，对表柔比星制剂的质量控制提供了新方法。 -
药理与临床2023, 48(01): 87-93.目的 了解青海省支气管肺泡灌洗液和合格痰标本来源细菌的耐药性变迁，为青海省下呼吸道病原菌感染抗菌药
物合理应用，以及抗菌药物制定和评价提供数据支持。方法 用WHONET5.6软件分析2015—2020年青海省来自支气管肺泡灌
洗液和合格痰标本分离鉴定的细菌药敏数据，并进行耐药性分析。结果 2015—2020年从支气管肺泡灌洗液和合格痰标本中共
分离出55288株细菌，分离排名前5的细菌分别是肺炎克雷伯菌(22.5%)、鲍曼不动杆菌(10.8%)、大肠埃希菌(9.7%)、金黄色葡萄
球菌(8.7%)和阴沟肠杆菌(7.5%)。药敏数据显示，肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和大肠埃希菌对大部分监测抗菌药物的敏感性均
有下降趋势，肺炎克雷伯菌相对于大肠埃希菌和阴沟肠杆菌药物敏感性较高，大部分敏感性在90%以上，3种细菌对碳青霉烯
类抗生素的耐药性均略有上升；鲍曼不动杆菌对所有监测抗菌药物的耐药性总体下降，但是耐药率相对较高；铜绿假单胞菌除
对左氧氟沙星的耐药率上升外，对其他抗菌药物的耐药率基本保持不变或下降；6年中MRSA的检出率分别是34.3%、37.0%、
39.0%、36.7%、37.8%和41.4%，未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药的金黄色葡萄球菌。肺炎链球菌对青霉素的敏感
性基本保持在95%左右。结论 青海省2015—2020年支气管肺泡灌洗液和合格痰标本分离的病原菌以革兰阴性菌为主，大部分
抗菌药物耐药率总体呈现下降趋势，碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和大肠埃希菌略有上升，呼吁临床医师送检高
质量的支气管肺泡灌洗液和合格痰标本，并根据细菌药敏结果合理使用抗生素。 -
药理与临床2023, 48(01): 94-100.目的 研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的标本分布、耐药情况、SCCmec、spa分型、相关毒力因子及生
物膜形成情况。方法 采用多重PCR扩增SCCmec、spa基因及毒力因子(tst、lukE、pvl、fnbA、fnbB、cna、clfA、clfB)；采用
Sanger双脱氧链终止法对扩增产物测序；采用微孔结晶紫染色法研究菌株生物膜形成。结果 标本来源以分泌物最多，其次是
痰；标本分布以儿童病区最多，其次为创伤病区及重症监护病区；SCCmec分型显示I型最多，占56%；spa分型以t437最多，占
43%；多数菌株同时携带3种及以上毒力因子，以cna、fnbB和clfA黏附分子为主；60%的MRSA菌株具有较强生物膜形成能力。
结论 MRSA在儿童病房的流行需要引起注意；ICU病区呼吸机引起的相关感染仍是一大难题。本医疗机构内MRSA(2018—
2019年)菌株以t437-SCCmecI型为主要流行克隆株。MRSA携带黏附毒素比率高，容易形成生物被膜，成为治疗的一大难题。 -
药理与临床2023, 48(01): 101-106.目的 应用全基因组分析方法对艰难梭菌感染可能的暴发流行进行识别和调查，为艰难梭菌感染防控提供可靠的
分子流行病学基础。方法 对8株ST37型艰难梭菌进行第二代高通量测序，并完成序列的拼接和注释。通过对其核心基因组进
行SNP分析，根据SNP数量以及相关临床资料分析有无院内暴发流行。同时将Genbank中公布了全基因组序列的艰难梭菌，进行
MLST分析，对其分析结果为ST37的菌株与本研究中的8株菌株进行SNP分析比较，了解这8株菌的可能来源。结果 以最早收
集的菌株WCHCD770作为参照，其他7株菌株的SNP值，最大为59，最小为38，提示它们并不是近期发生的传播事件。而这8株
菌两两相互进行SNP计算，其中WCHCD1577、WCHCD1641仅为10，提示它们可能来源于一个克隆，可能存在院内传播。通过
分析比较这8株菌与Genbank中的其他ST37型艰难梭菌发现，它们的致病决定区(PaLoc)序列完全相同，证实了ST37型艰难梭菌
的PaLoc在世界范围克隆传播，同时对它们的SNP比较分析，发现WCHCD1577、WCHCD1641、WCHCD1216、WCHCD109、
WCHCD159与2006年在爱尔兰分离的菌株M68的SNP最小，WCHCD770、WCHCD1262、WCHCD1450与加拿大分离的菌株VL-
0005的SNP最小。提示这些菌株的可能来源。结论 8株ST37型艰难梭菌可能存在克隆传播，值得感染防控重视。 -
药理与临床2023, 48(01): 107-114.目的 对上海交通大学医学院附属新华医院引起非妊娠成人患者血流感染的无乳链球菌进行毒力基因检测和
分子分型研究。方法 收集上海市某三甲医院2012—2020年分离的引起非妊娠成人患者血流感染的无乳链球菌(group B
Streptococcus，GBS)临床菌株，通过病例系统收集相应患者的临床资料进行统计分析。采用MALDI-TOF MS对菌株进行鉴
定；采用Vitek-2 Compact联合纸片扩散法(K-B法)进行药物敏感试验；采用PCR方法和琼脂糖凝胶电泳方法进行与菌株黏附、
侵袭和免疫逃逸相关的毒力基因检测；采用多重PCR方法进行血清学分型；采用MLST方法进行分子分型研究，分型结果采用
Bionumeric 8.0软件分析菌株间亲缘关系。结果 2012—2020年共分离到13株符合入组条件的GBS菌株，相应患者人群以中老
年为主，占92.4%；男女比例为3.3:1，且大部分患者有心律失常、糖尿病或肝硬化等基础疾病。药敏结果提示菌株对氨苄西
林、万古霉素、利奈唑胺、青霉素、头孢曲松、替加环素等抗菌药物仍然保持高度敏感，对克林霉素耐药率最高达84.6%，其
次是四环素(61.5%)和红霉素(53.8%)。黏附作用相关基因中fbsB、pavA基因携带率100%，而菌毛编码基因gbsPC1的携带率最低
(46.15%)；侵袭力相关基因中cylX、cylD、cylG、acpC、cylZ、cylA、cylB、cylE、cylF、cylI、cylJ、cfb、hylB和bca基因的携
带率100%，cylK和spb1的携带率较低分别为7.69%和38.45%，rib基因在13株菌种均未检出。免疫逃避相关基因中cpsF、cpsE、
cpsD、cpsB、neuA、neuD、neuC、neuB和pbp1A的基因携带率为100%，bac、cpsJ、cpsI、cpsG的携带率较低。菌株的血清学分
型以Ⅰb型为主，占38.5%(5/13)；13株菌共分为10种ST型，同源性分析显示菌株亲缘关系较远。结论 无乳链球菌引起非妊娠
成人患者血流感染的危险因素可能为高龄、男性以及心律失常等基础疾病，菌株对克林霉素、四环素耐药率较高，且携带较多
毒力基因，血清分型以Ⅰb型为主，但ST分型较为分散，未出现暴发流行趋势。 -
药理与临床2023, 48(01): 115-121.目的 系统性评价胶体金免疫层析法在耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)碳青霉烯酶型检测中的价值及性能情况，
为实验室进行CRE碳青霉烯酶快速检测提供可靠依据。方法 对收集的70株无菌部位分离的CRE菌株同时使用PCR扩增、基
因测序和胶体金免疫层析法进行碳青霉烯酶型检测，以测序结果为参考标准，评价胶体金免疫层析法的实验室检测性能。结
果 检出碳青霉烯酶基因69株，其中KPC型49株，OXA-48型12株，IMP型1株，NDM型3株，同时检出KPC和OXA-48型2株，
同时检出OXA-48和NDM型1株，同时检出KPC和NDM型1株，未检出以上5种基因型1株。胶体金免疫层析法结果与测序结果相
比灵敏度100%，特异度97.1%。不符合2株，其中1株为测序结果同时存在KPC和OXA-48两种型，胶体金检测结果为KPC型；1
株为测序结果同时存在KPC和NDM两种型，胶体金检测结果为KPC型。结论 胶体金免疫层析法作为一种新的CRE碳青霉烯酶
型检测方法，操作简单，结果容易判读，能够短时间内检测出CRE中的产KPC、OXA-48、VIM、IMP和NDM型碳青霉烯酶的
情况，灵敏度和特异度能够满足临床需求，可作为实验室进行碳青霉烯酶型快速检测的方法，指导临床诊治CRE。
